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          首次在體外重構(gòu)減數(shù)分裂DNA雙鏈斷裂形成

          2025-02-21 09:19:01 來源: 中國科學(xué)院

          219中國科學(xué)院分子細(xì)胞科學(xué)卓越創(chuàng)新中心童明漢課題組聯(lián)合上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院黃旲團(tuán)隊(duì),在《自然》(Nature)上在線發(fā)表了題為In vitro reconstitution of meiotic DNA double-strand break formation的研究成果。該研究基于體外表達(dá)和純化的小鼠SPO11-TOP6BL復(fù)合體,首次在體外成功重構(gòu)DNA雙鏈斷裂(DSB)形成,為剖析減數(shù)分裂同源重組機(jī)制建立了研究平臺。S6F流量資訊——探索最新科技、每天知道多一點(diǎn)LLSUM.COM

          減數(shù)分裂是存在于有性生殖生物中的特殊細(xì)胞分裂方式,也是有性生殖的基礎(chǔ)。同源重組是減數(shù)分裂中最重要的生物學(xué)事件之一。同源重組使親本雙方的遺傳物質(zhì)發(fā)生交換,增加了物種遺傳的多樣性,并能夠使同源染色體之間建立物理連接,以確保它們精確分離,維持染色體數(shù)量恒定。同源重組起始于程序性DSB形成。1997年,有研究發(fā)現(xiàn),Spo11是催化酵母減數(shù)分裂DSB形成的關(guān)鍵蛋白,并揭示其在切割DNA雙鏈后會共價(jià)結(jié)合在DNA5'末端。然而,如何在體外表達(dá)獲得有活性的Spo11以及如何在體外重構(gòu)減數(shù)分裂DSB形成過程尚不清楚。S6F流量資訊——探索最新科技、每天知道多一點(diǎn)LLSUM.COM

          Spo11是高度保守的蛋白,屬于II B型拓?fù)洚悩?gòu)酶家族中拓?fù)洚悩?gòu)酶VITop6)家族。Top6由兩個(gè)催化亞基(Top6A)和兩個(gè)調(diào)控亞基(Top6B構(gòu)成異源四聚體,其活性依賴于Top6ATop6B的協(xié)同作用。SPO11Top6A的同源物,而TOP6BL作為Top6B的哺乳動物同源物,直到2016年才被發(fā)現(xiàn),并被證明也是減數(shù)分裂DSB形成所必需。S6F流量資訊——探索最新科技、每天知道多一點(diǎn)LLSUM.COM

          為解決體外重構(gòu)減數(shù)分裂DSB形成這一難題,童明漢課題組利用體外蛋白表達(dá)純化系統(tǒng)獲得SPO11-TOP6BL復(fù)合體,并首次在體外重現(xiàn)其切割DNA雙鏈的活性。隨后,童明漢課題組與黃旲團(tuán)隊(duì)合作,采用凝膠過濾層析、交聯(lián)質(zhì)譜、Pull Down等方法,探討了SPO11-TOP6BL復(fù)合體的生化特征,并證實(shí)該復(fù)合體在溶液中主要以異源二聚體形式存在,且只有極少部分能夠形成異源四聚體。進(jìn)一步,研究證明,在切割DNA后,SPO11共價(jià)結(jié)合于切割產(chǎn)物的5'末端。于此,困擾該領(lǐng)域近30年的體外重構(gòu)減數(shù)分裂DSB形成難題得以解決。S6F流量資訊——探索最新科技、每天知道多一點(diǎn)LLSUM.COM

          值得一提的是,美國紀(jì)念斯隆-凱特林癌癥中心Scott Keeney團(tuán)隊(duì)、比利時(shí)法語魯汶大學(xué)Corentin Claeys Bouuaert團(tuán)隊(duì)分別在《自然》上發(fā)表了背靠背論文。同期《自然》為三篇論文配發(fā)了評述文章。S6F流量資訊——探索最新科技、每天知道多一點(diǎn)LLSUM.COM

          研究工作得到國家自然科學(xué)基金委員會、科學(xué)技術(shù)部、中國科學(xué)院及上海市的支持。S6F流量資訊——探索最新科技、每天知道多一點(diǎn)LLSUM.COM

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          SPO11-TOP6BL切割DNA后共價(jià)連接在DNA5'S6F流量資訊——探索最新科技、每天知道多一點(diǎn)LLSUM.COM

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